厭氧菌是自然界中分布廣泛、性能獨特的一類微生物, 專性厭氧菌因其細胞內缺乏超氧化物歧化酶、過氧化氫酶或過氧化物酶,因此無法消除機體在有氧條件下產生的有毒產物——超氧陰離子自由基，故這類微生物極易受氧毒害。專性厭氧微生物即使短暫地把它暴露于空氣中,也會引起損傷致死。因此對它們進行分離、培養(yǎng)和研究時,就必須有一套相應的培養(yǎng)分離方法。 目的要求 

1、了解厭氧菌培養(yǎng)常用方法：皰肉培養(yǎng)法、焦性沒食子酸法、厭氧罐法、厭氧箱法、厭氧培養(yǎng)袋法等。 

2、掌握結核桿菌的形態(tài)特點，熟悉結核桿菌的培養(yǎng)特性。 3、掌握抗酸染色的原理及操作過程。 

4、了解結核桿菌標本的采集、培養(yǎng)前處理及制片。  材料  

皰肉培養(yǎng)基、厭氧罐、厭氧箱、厭氧培養(yǎng)袋、焦性沒食子酸、NaOH、脫脂棉等 內容與方法 

厭氧菌培養(yǎng)方法：包括物理、化學和生物學方法（總之為厭氧菌培養(yǎng)形成一種無氧環(huán)境）  1. 厭氧罐法： 

厭氧產氣袋加入水后會產生氫氣和二氧化碳，氫氣在厭氧催化劑（冷觸酶鈀粒鈀粒由粉紅色變成淺蘭色而失效，160℃2h，即可恢復其活力而重復使用）的作用下，與氧結合生成水，可在30分鐘內將氧含量降**1%以下。二氧化碳可以促進厭氧菌的生長。罐內放有煮沸去氧的美蘭指示劑一管。 [每次要新鮮配制，在試管內將亞甲藍(0.5%亞甲藍3 ml加水**100 ml)、6%葡萄糖和氫氧化鈉(1/10 mol/L NaOH 6 ml加水**100 ml)3種溶液等量混合并煮沸還原**無色，立即將指示劑管放入預先裝好培養(yǎng)物的罐內 。如果能在孵育的整個過程中維持厭氧條件，則指示劑溶液將無色，否則指示劑則變色。亞甲藍有氧為藍色，無氧為無色。] 亞甲藍作為一種氧化還原指示劑。 2.焦性沒食子酸法： 

焦性沒食子酸+NaOH→焦性沒食子橙（黑、褐色）[吸收游離的氧氣]。 培養(yǎng)皿法用培養(yǎng)皿蓋，鋪上一薄層滅菌脫脂棉，將1g焦性沒食子酸放于其上。用肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基倒平板，待凝固稍干燥后，在平板上一半劃線接種巴氏芽孢梭菌，下一半劃線接種熒光假單胞菌，并在皿底用記號筆作好標記。滴加10％NaOH溶液約0.5ml于焦性沒食子酸上，切勿使溶液溢出棉花，立即將已接種的平板覆蓋于玻璃板上或培養(yǎng)皿蓋上，必須將脫脂棉全部罩住，焦性沒食子酸反應物切勿與培養(yǎng)基表面接觸，以溶化的石蠟 密封皿底與玻璃板或皿蓋的接觸處。置37℃溫箱培養(yǎng)24～48h。   3.厭氧培養(yǎng)箱法： 

由厭氧環(huán)境操作箱、恒溫培養(yǎng)箱、高度真空傳遞箱等組成，能任意輸入所需氣體，準確調節(jié)流量，以滿足厭氧菌生長需要。.